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用HPLC测定复合表面活性剂中的瓶塞浸出物的方法学验证
2014/11/19 09:26:48 1 概述
本试验主要研究弹性体胶塞接触含表面活性剂（聚氧乙烯化蓖麻油）和乙醇的试液时产生的可提取物。其中潜在的可提取物有二硫代氨基甲酸锌（Z）、2,6-二叔丁基对甲酚（BHT）、抗氧化剂辛基二苯胺(ODA)、硫（S）、苯酚(P) 、四(3,5-二叔丁基-4-羟基)苯丙酸季戊四醇酯（CAS:6683-19-8）
为了检测配方中六个目标物，采用了三种高效液相色谱法（均采用紫外检测器），方法见表1。方法讨论见参考文献1。
2 验证
⑴线性：线性是将六个标准品和基质空白，每个样品进样两次，平均峰面积对浓度进行拟合。曲线拟合结果见表2，并得到线性范围。
⑵准确度：准确度是将空白样品加标对照品（三个水平），每个样品进样三次。准确度通过对照品测得量与加入量比率计算回收率来评估。准确度的结果见表2。对于所有分析物和加标浓度水平，回收率范围在90-130%之间。
| 表1 验证方法色谱系统的运行条件表a | |||||||||
| 运行值 | |||||||||
| 参数 | 方法1 | 方法2 | 方法3 | ||||||
| 分析物 | Z,P,B | S,I | ODA | ||||||
| 色谱柱 | YMC-PACK Cyano, | Water XTerra MS | Water XTerra MS | ||||||
| 150mm*4.6mm, | C18,50*4.6mm, | C18,50*4.6mm, | |||||||
| 5µm | 5µm | 5µm | |||||||
| 色谱柱温度 | 环境温度 | 环境温度 | 环境温度 | ||||||
| 流动相A | 水：乙腈：TFA | 乙腈：水 | 乙腈：水 | ||||||
| （90:10:0.05） | （25:75） | （25:75） | |||||||
| 流动相B | 乙腈：TFA | 乙腈 | 乙腈 | ||||||
| （100:0.05） | |||||||||
| 梯度 | 1. B: 0-50%， | 1.50%B,0-15min | 1.50%B,0-15min | ||||||
| 0-30min | 2.55%B,15-25min | 2.55%B,15-25min | |||||||
| 2. B: 50-100%， | 3.65%B,25-35min | 3.58%B,25-28min | |||||||
| 30-32min | 4.100%B,35-75min | 4.100%B,28-30min | |||||||
| 3. B:100%， | 5.100%B,75-78min | 5.100%B,30-35min | |||||||
| 32-35min | 6.100%A,78.1-85min | 6.100%A36-45min | |||||||
| 4. A:0-100%， | |||||||||
| 35.0-35.1min 5．A:100%， |
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| 35.1-40min | |||||||||
| 流速 | 1mL/min | 1mL/min | 1mL/min | ||||||
| 检测波长 | 215nm | 210nm | 210nm | ||||||
| a见参考文献1 | |||||||||
| 表2 案例研究a，线性和准确度 | |||||||||
| 线性 | 准确度 | ||||||||
| 浓度范围 | 浓度范围 | 回收率 | |||||||
| 分析物 | ppm | r2 | ppm | % | |||||
| Z | 1-100 | 0.999 | 5-20 | 97.2-105 | |||||
| P | 5-100 | 1.000 | 10-20 | 99.7-121 | |||||
| B | 10-100 | 1.000 | 10-20 | 93.0-97.8 | |||||
| S | 5-50 | 0.994 | 5-20 | 91.9-99.7 | |||||
| I | 5-50 | 0.997 | 5-20 | 91.0-94.2 | |||||
| ODA | 5-100 | 0.99 | 15-50 | 102-116 | |||||
| a见参考文献1 | |||||||||
| 表3案例研究a ，精密度 | |||||
| 精密度，%RSD | |||||
| 分析物 | 样品b | 标准品c | 含量d | 日内e | 日间f |
| Z | 1.8 | 2.6 | 3.9 | 1.3 | 4.6 |
| P | 2.4 | 1.8 | 9.1 | 1.5 | 9.1 |
| B | 7.2 | 1.6 | 5.3 | 0.2 | 10.2 |
| S | 1.6 | 1.8 | 7.3 | 0.4 | 11.2 |
| I | 0.8 | 4.2 | 2.4 | 0.5 | 3.9 |
| ODA | 4 | 4 | 6.5 | 0.9 | 11.8 |
| a见参考文献1 b数据是中间浓度范围的加标样品进样三次的平均结果 c 20ppm浓度标样进样六次测定结果 d用每个分析物准确度结果（回收率%）反映精密度 e用一天内三个浓度各进样三次测定的响应因子计算精密度 f用新鲜配制的标准品三天测定的响应因子计算精密度。 |
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⑷其它验证参数：专属性采用空白对照（没有加标物）和加标空白样品液分别进样。样品中色谱峰虽然很多，但只要空白对照中没有色谱峰干扰样品测定，所有分析物色谱峰均为“纯”峰，即可认为专属性没有问题。
检测限和定量限是通过测定系列稀释的对照品得到。检测限通过最低浓度溶液确定，其中能目测到与空白溶液比较的色谱峰。定量限是含量测定时精密度达到要求的对照品的最低浓度。六个目标可提取物的定量限在1-10ppm范围内。
对照品的稳定性测定方法是分别在室温下和5℃时测定对照品在两天内的浓度变化。作者认为含量结果变化小于10%即可认为溶液稳定，所以得出结论为样品在室温和5℃下至少两天内是稳定的。
